Microarray para Cáncer de Útero

Microarray CGH 

 

Microarray CGH se ha realizado mediante el sistema de GenoSensor Array 300, siguiendo las instrucciones del fabricante (ABAD-Vysis, Downers Grove, IL, EE.UU.). Cada serie contiene 861 puntos, en representación de 287 regiones cromosómicas que son alterados en cáncer humano, como los telómeros, regiones que participan en microdeleciones, oncogenes y genes supresores de tumor. En resumen, 100 ng de DNA genómico fueron etiquetados por un azar primer reacción durante dos horas. ADN tumoral fue marcado con Cy3 y las mujeres normales de referencia de ADN con Cy5. Después de la reacción de etiquetado, las sondas fueron digeridos con DNAse a 15 ° C durante una hora., Seguido de dos etanol-purificaciones; finalmente, el tamaño de la sonda fue verificada por electroforesis en gel. La mezcla consistía en la hibridación de 2,5 μ l de cada una de las autoridades nacionales designadas etiquetados diferencialmente más 25 μ l de buffer de hibridación proporcionado en el kit. Esta mezcla fue desnaturalizado a 80 ° C durante 10 min. A 80 ° C, seguido de incubación a 37 ° C durante una hora. Cinco μ l de esta sonda se fue aplicado en la zona de manchas de la matriz en virtud de un coverslip y hibridizada en una cámara de humedad que contiene 50% formamida (FA) / 2XSSC a 37 ° C durante 72 hrs. Después de la hibridación, las matrices se lavaron 3X en el 50% FA/2XSSC a 40 ° C durante 10 min / lavado, seguido de cuatro de 5 min. Se lava en 1XSSC a temperatura ambiente. Por último, los arreglos fueron brevemente lavarse con agua destilada, counterstained montado y en la oscuridad durante 45 min. Con DAPI (4,6-diamino-2-phenylindole).

Referencia bibliográfica:

http://viaclinica.com/article.php?pmc_id=1186020