Microarray para Cáncer de Útero
Microarray CGH
Microarray CGH se ha realizado mediante el sistema de GenoSensor Array
300, siguiendo las instrucciones del fabricante (ABAD-Vysis, Downers
Grove, IL, EE.UU.). Cada serie contiene 861 puntos, en representación
de 287 regiones cromosómicas que son alterados en cáncer humano, como
los telómeros, regiones que participan en microdeleciones, oncogenes y
genes supresores de tumor. En resumen, 100 ng de DNA genómico fueron
etiquetados por un azar primer reacción durante dos horas. ADN tumoral
fue marcado con Cy3 y las mujeres normales de referencia de ADN con Cy5.
Después de la reacción de etiquetado, las sondas fueron digeridos con
DNAse a 15 ° C durante una hora., Seguido de dos etanol-purificaciones;
finalmente, el tamaño de la sonda fue verificada por electroforesis en
gel. La mezcla consistía en la hibridación de 2,5 μ l de cada una de
las autoridades nacionales designadas etiquetados diferencialmente más
25 μ l de buffer de hibridación proporcionado en el kit. Esta mezcla
fue desnaturalizado a 80 ° C durante 10 min. A 80 ° C, seguido de
incubación a 37 ° C durante una hora. Cinco μ l de esta sonda se fue
aplicado en la zona de manchas de la matriz en virtud de un coverslip y
hibridizada en una cámara de humedad que contiene 50% formamida (FA) /
2XSSC a 37 ° C durante 72 hrs. Después de la hibridación, las matrices
se lavaron 3X en el 50% FA/2XSSC a 40 ° C durante 10 min / lavado,
seguido de cuatro de 5 min. Se lava en 1XSSC a temperatura ambiente.
Por último, los arreglos fueron brevemente lavarse con agua destilada,
counterstained montado y en la oscuridad durante 45 min. Con DAPI
(4,6-diamino-2-phenylindole).
Referencia bibliográfica:
http://viaclinica.com/article.php?pmc_id=1186020
